Brotherhood komt op 18 november uit op de Xbox 360 en PlayStation 3. De bèta bevat negen verschillende personages en twee maps, namelijk Rome en Castel Gandolfo. Acht spelers kunnen het opnemen in twee modi, te weten Allience en Wanted. In Alliance moeten spelers in teams van twee "contracten vervullen en vijanden verwarren" en in Wanted strijden spelers ieder voor zich en moeten zij andere spelers vermoorden.

Assassin's Creed: Brotherhood speelt zich af in 1499, kort na de gebeurtenissen in Assassin's Creed 2. Monteriggioni is belegerd door de troepen van Cesare Borgia. Tijdens het gevecht wordt Mario, de oom van Ezio Auditore di Firenze, vermoord en belandt de Apple of Eden in handen van Cesare. De game spoelt daarna vooruit naar het jaar 1503, wanneer Ezio een Master Assassin is en op wraak zint en zich daarom een weg baant naar Rome.