Dit geldt in ieder geval voor de spelcomputerversies van de first-person shooter; het is nog onduidelijk of de PC-versie meer spelers zal ondersteunen. Net als in de populaire online shooters Call of Duty en Battlefield verdienen spelers ervaringspunten in de multiplayermodus van Duke Nukem Forever waarmee hun personage steeds beter kan worden. Spelers stappen allen in de schoenen van Duke Nukem zelf, met rode of blauwe shirts wordt aangegeven in welk team een speler zit.

Vanaf de release zijn er tien maps en vier spelmodi beschikbaar: Dukematch is DNF's naam voor deathmatch, Team Dukematch is team deathmatch, Hail to the King is de modus king of the hill en Capture the Babe is DNF's versie van capture the flag. In deze laatste modus strijden teams niet om elkaars vlag, maar om elkaars babe. Deze babes kunnen door het lint gaan wanneer ze worden ontvoerd, en worden weer rustig na een klap in het gezicht. Een van de tien maps is een remake van Duke Burger uit Duke Nukem 3D; in de remake rennen spelers als miniatuur-Dukes rond door het level. Andere maps brengen spelers onder andere naar een wildweststadje en naar een casino in Las Vegas.

Jetpack

Hoewel spelers in de singleplayermodus niet kunnen vliegen met een jetpack, is dit wel een optie in de multiplayer van Duke Nukem Forever. Ook maakt het Holoduke-wapen weer zijn opwachting. Hiermee kunnen spelers een hologram van zichzelf in een arena plaatsen terwijl ze zelf deels onzichtbaar worden. Met de Shrinker worden tegenstanders verkleind, ze kunnen dan nog steeds wapens gebruiken, maar die doen tien procent van de normale schade. Steroïden zorgen ervoor dat Duke zijn vijanden met één stomp kan uitschakelen en laten hem sneller rennen. Een demo van de multiplayermodus wordt verwacht voordat de game op 6 mei uitkomt voor PC, PlayStation 3 en Xbox 360.