Spelers kunnen in de coöperatieve modus in de huid kruipen van Jennifer Redding en kunnen hun eigen vrouwelijke marinier maken voor de competitieve multiplayer. Spelers kunnen onder andere kiezen wat voor uitrusting ze dragen en een vlammenwerper op hun geweer monteren.
Eerder werd nog gedacht dat er geen speelbare vrouwelijke personages in Aliens: Colonial Marines zaten, waarna er een petitie werd opgezet om dit alsnog te bewerkstelligen. Dit betrof echter een misverstand, zo laat Gearbox-hoofd Randy Pitchford weten. Toen door Gearbox werd gezegd dat er enkel mannelijke personages speelbaar waren, werd de E3-demo bedoeld en niet het gehele spel. Volgens Pitchford was het altijd al het plan om ook vrouwelijke mariniers speelbaar te maken.